即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的用儀器又稱微孔板檢測(cè)器。可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和自動(dòng)2大類,但其作原理基本上都是致的,其核心都是個(gè)比色計(jì),即用比色法來(lái)行分析。 測(cè)定般要求測(cè)試液的zui終體積在250μL以下,用般光電比色計(jì)無(wú)法成測(cè)試,因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有殊要求。
原理
酶標(biāo)儀實(shí)際上就是臺(tái)變相光電比色計(jì)或分光光度計(jì),其基本作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同. 圖示是種單通道自動(dòng)樣的酶標(biāo)儀作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器變成束單色光,入塑料微孔中的待測(cè)標(biāo)本.該單色光分被標(biāo)本吸收,另分則透過(guò)標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上,光電檢測(cè)器將這待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào).電信號(hào)經(jīng)前置放大,對(duì)數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,zui后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果. 微處理機(jī)還通過(guò)控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板,從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)樣檢測(cè)過(guò)程.而另些酶標(biāo)儀則是采用手移動(dòng)微孔板行檢測(cè),因此省去了X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路,從而使儀器更小巧,結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單.
微孔板是種經(jīng)事包埋用于放置待測(cè)樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻致的小孔,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液.
光是電磁波,波長(zhǎng)100nm~400nm稱為紫外光,400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩,是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來(lái)。綠色植物之所以是綠色,是因?yàn)橹参镂盏拇蠓譃榧t橙光和藍(lán)紫光,但對(duì)綠色不吸收,反射出來(lái),所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在定波長(zhǎng)下,檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。
隨著檢測(cè)方式的發(fā)展,擁有多種檢測(cè)模式的單體臺(tái)式酶標(biāo)儀叫做酶標(biāo)儀,可檢測(cè)吸光度(Abs)、熒光強(qiáng)度(FI)、時(shí)間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學(xué)發(fā)光(Lum)。
酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長(zhǎng)范圍內(nèi)的意波長(zhǎng),而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片,只能截取定波長(zhǎng)行檢測(cè)。
酶標(biāo)儀(MicroplateReader)是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)(EIA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果行讀取和分析的業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過(guò)偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過(guò)顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。
酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)、食品和環(huán)境中,別在近幾年中,由于大量的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用,使得酶標(biāo)儀在生殖保健域中應(yīng)用越來(lái)越廣泛,同時(shí)促了生殖健康水平提。
目前內(nèi)許多計(jì)生站系統(tǒng)開(kāi)展了酶免檢測(cè)項(xiàng)目,如:乙肝五項(xiàng)、艾滋病檢測(cè)、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測(cè)、激素檢測(cè)等。過(guò)去多數(shù)采用目測(cè)方法,報(bào)出的結(jié)果缺乏的依據(jù)。例如:某弓形蟲(chóng)檢測(cè)試劑盒中,臨界值規(guī)定為:陰性對(duì)照品的OD值×2.5,通過(guò)目測(cè)無(wú)法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否過(guò)臨界值。肉眼行兩孔之間的顏色可能還行,但孔的顏色是否過(guò)另孔顏色的2.5倍就不可能。
內(nèi)多家機(jī)構(gòu),如衛(wèi)生臨床檢驗(yàn)中心和計(jì)劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性,并要求酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀,酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀,并提供酶標(biāo)儀測(cè)定的原始數(shù)據(jù),而各廠家的試劑盒說(shuō)明書(shū)沒(méi)有是讓用目測(cè)的。同時(shí)酶免檢測(cè)的項(xiàng)目往往是些實(shí)質(zhì)性的感染和病變(如:肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等),判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn),由誤診引起的糾紛很難處理。另外,住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、艾滋等EIA試劑檢測(cè)是避免因輸血引起感染引發(fā)的療事故糾紛的手段,正逐漸被許多單位所采用。
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